在藥品的微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)污(wu)染控(kong)制(zhi)體系(xi)中,**是極其重要(yao)的一個(ge)組成部(bu)分(fen)(fen)。**工藝(yi)的選擇、開(kai)發、驗證、監控(kong)等整個(ge)生(sheng)(sheng)(sheng)命(ming)周期中,離不開(kai)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)示劑的使用(yong)(yong),只有(you)物(wu)理殺滅和生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)殺滅效果均達到(dao)預(yu)定的標準(zhun),**工藝(yi)方可用(yong)(yong)于產(chan)品或組件的**。關于生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)示劑的使用(yong)(yong),行(xing)業內一直(zhi)存在諸多(duo)疑問,本文分(fen)(fen)兩部(bu)分(fen)(fen)對生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)示劑進行(xing)詳細的介(jie)紹,**部(bu)分(fen)(fen)重點介(jie)紹理論(lun)基礎,包括**動(dong)力學(F0值、D值等(deng)概念和(he)計算)、**法的(de)選(xuan)擇和(he)監控、物理殺滅(mie)和(he)生物殺滅(mie)的(de)一致(zhi)性和(he)驗證(zheng)等(deng)內容;**部分重(zhong)點(dian)介(jie)紹生物指示劑的(de)種類、包裝形(xing)式(shi)、選(xuan)擇、使(shi)用和(he)質量控制等(deng)內容。
生物指(zhi)示(shi)劑(Biological Indicators),根據ISO11138的(de)(de)(de)定(ding)義 - test system containing viable microorganisms providing a defined resistance to a specified sterilization process,即含有(you)活(huo)的(de)(de)(de)微(wei)生物的(de)(de)(de)測試系統,其為特定(ding)的(de)(de)(de)**工(gong)藝(yi)提供確定(ding)的(de)(de)(de)抵抗力。2015年(nian)版《中國藥典》四部(bu)1421**法的(de)(de)(de)定(ding)義為“生物指(zhi)示(shi)劑系一類(lei)特殊的(de)(de)(de)活(huo)微(wei)生物制品,可(ke)用于確認**設(she)備的(de)(de)(de)性能、**程序的(de)(de)(de)驗證(zheng)、生產過程**效果的(de)(de)(de)監控等。”從定(ding)義可(ke)以(yi)看(kan)出,生物指(zhi)示(shi)劑是(shi)一類(lei)含有(you)活(huo)的(de)(de)(de)微(wei)生物的(de)(de)(de)測試系統,其主要用于**工(gong)藝(yi)的(de)(de)(de)驗證(zheng)或(huo)監控。
生物指示劑是用于**工藝,在介(jie)紹其之前(qian),我們需(xu)要了解(jie)**的原理,以便理解(jie)生物指示劑的特性、使用和質量控(kong)制。
一(yi)、**原理
所(suo)謂(wei)**,即“用適(shi)當(dang)的(de)(de)(de)(de)物(wu)理(li)或(huo)(huo)化學(xue)手(shou)段(duan)將物(wu)品中(zhong)活(huo)的(de)(de)(de)(de)微(wei)生物(wu)殺滅(mie)(mie)或(huo)(huo)除(chu)去,從(cong)而使物(wu)品殘存活(huo)微(wei)生物(wu)的(de)(de)(de)(de)概率下降(jiang)至預期的(de)(de)(de)(de)無菌(jun)保證水平的(de)(de)(de)(de)方法。(2015年版《中(zhong)國(guo)藥典》)”**主(zhu)(zhu)要有殺滅(mie)(mie)和除(chu)去兩(liang)種方式(shi),前者(zhe)是(shi)通過物(wu)理(li)或(huo)(huo)者(zhe)化學(xue)的(de)(de)(de)(de)手(shou)段(duan)殺滅(mie)(mie)產品中(zhong)的(de)(de)(de)(de)微(wei)生物(wu),后(hou)者(zhe)則是(shi)通過一定的(de)(de)(de)(de)分離機制(目前主(zhu)(zhu)要是(shi)過濾的(de)(de)(de)(de)方式(shi))將微(wei)生物(wu)從(cong)產品中(zhong)分離。這兩(liang)種方式(shi)的(de)(de)(de)(de)機理(li)不同(tong)、動力學(xue)不同(tong),其適(shi)合的(de)(de)(de)(de)模型也不同(tong)。本文所(suo)闡述(shu)的(de)(de)(de)(de)主(zhu)(zhu)要是(shi)前者(zhe),即殺滅(mie)(mie)的(de)(de)(de)(de)方式(shi)去除(chu)微(wei)生物(wu)。
當前制藥(yao)工(gong)業所用的**方(fang)式很多,包括熱(re)力學**,如(ru)(ru)濕熱(re)**,如(ru)(ru)蒸汽**、過(guo)熱(re)水**;干熱(re)**;輻(fu)照**,如(ru)(ru)γ射(she)線**、X射(she)線**、電子束**;氣體**,如(ru)(ru)環氧乙烷**、氣態過(guo)氧化氫**、甲(jia)醛**、臭氧**等。這些**方(fang)式的**介質不同(tong),殺(sha)滅微生物的機理也(ye)不同(tong),相(xiang)應的工(gong)藝開發、工(gong)藝控制和工(gong)業驗證也(ye)不盡相(xiang)同(tong)。但是,除了輻(fu)照**外,從**模型的研究(jiu)、**工(gong)藝的驗(yan)證和(he)生物(wu)指示(shi)劑的選擇和(he)使用來看(kan),這(zhe)些**方式都有共通之處。因此,本文以研究(jiu)*為深入的濕熱(re)**為例,詳細介紹**動力(li)學和(he)**驗(yan)證,從而深入了解生物(wu)指示(shi)劑在其中(zhong)的作(zuo)用。
濕熱**主要是通過高溫使(shi)得微(wei)生物的蛋(dan)白質、核酸等分子發生變性(xing),從而殺滅(mie)微(wei)生物。這個(ge)過程(cheng)與很(hen)多(duo)因素有關(guan),如(ru)**溫度(du)、**時間、微(wei)生物的種(zhong)類和(he)數量、微(wei)生物所處的環境、蒸汽質量等等。為研究**的動力學,我(wo)們把微(wei)生物的數量(N)對(dui)**時間(t)作曲線(xian),關(guan)系如(ru)下:
這一曲線關系不利于**的(de)研究(jiu),如果把微生物的(de)數量(liang)用(yong)對數值(zhi)進(jin)行處理(lgN),再對時間(t)作曲線,則(ze)會得到以下的曲線
這里我們可以看到(dao),兩者(微(wei)(wei)生物數(shu)量對(dui)數(shu)值lgN和**時間(jian)t)成直線關系。這一轉換(huan)大大方便了**動(dong)力(li)學的研究,也構成了整(zheng)個濕熱(re)**模型的基礎。基于此模型,我們了解以下(xia)幾個重(zhong)要的參數(shu):
? 微生物的(de)耐熱性,D值(zhi)的(de)概念:
自(zi)然界的(de)(de)微(wei)(wei)生(sheng)物種類多(duo)種多(duo)樣(yang),不(bu)同(tong)微(wei)(wei)生(sheng)物的(de)(de)耐(nai)熱(re)(re)性(xing)是不(bu)一(yi)樣(yang)的(de)(de),反映(ying)在(zai)**曲線(xian)(xian)(lgN~t)上,耐(nai)熱(re)(re)性(xing)弱的(de)(de)微(wei)(wei)生(sheng)物lgN隨(sui)著(zhu)時間下降(jiang)(jiang)較快,而耐(nai)熱(re)(re)性(xing)強的(de)(de)微(wei)(wei)生(sheng)物lgN隨(sui)溫(wen)度下降(jiang)(jiang)的(de)(de)速度慢(man)。這一(yi)點*直接的(de)(de)反映(ying)便是直線(xian)(xian)的(de)(de)斜率(lv)(k),如果直線(xian)(xian)的(de)(de)斜率(lv)(**值,如下圖(tu))越大,微(wei)(wei)生(sheng)物lgN下降(jiang)(jiang)越快,耐(nai)熱(re)(re)性(xing)越低,反之(zhi)亦然
雖然斜(xie)率(lv)k值(zhi)可以反應這一(yi)(yi)(yi)關系,但是為了便于理(li)(li)(li)解和日常(chang)運用(yong),我們(men)在斜(xie)率(lv)k的(de)(de)(de)(de)基礎上進行(xing)一(yi)(yi)(yi)個(ge)簡單(dan)的(de)(de)(de)(de)變(bian)換(huan),引入(ru)D值(zhi)的(de)(de)(de)(de)概(gai)念。令D=?1/k=△t/△lgN,即,D值(zhi)可以理(li)(li)(li)解為微(wei)生物數量下降一(yi)(yi)(yi)定的(de)(de)(de)(de)對數值(zhi)所需要的(de)(de)(de)(de)時間(jian)。當△lgN為1時,所需要的(de)(de)(de)(de)**時間(jian)恰(qia)好等于D值(zhi),故(gu)D值(zhi)定義為使微(wei)生物下降一(yi)(yi)(yi)個(ge)對數值(zhi)所需要的(de)(de)(de)(de)**時間(jian)。因微(wei)生物數量下降一(yi)(yi)(yi)個(ge)對數值(zhi)與殺滅(mie)90%的(de)(de)(de)(de)意義相同(tong),故(gu)D值(zhi)又稱之為90%殺滅(mie)時間(jian)。這樣的(de)(de)(de)(de)簡單(dan)轉換(huan),使得(de)D值(zhi)的(de)(de)(de)(de)定義易于理(li)(li)(li)解,在**工(gong)藝(yi)中也方便應用(yong),這一(yi)(yi)(yi)點(dian)在后面的(de)(de)(de)(de)介紹中會(hui)得(de)到(dao)體現。
D值(zhi)的影響因素很多,包括(但不限(xian)于):
-
生(sheng)物的種類和形式,一般芽孢(bao)(bao)桿菌以芽孢(bao)(bao)的形式存在時(shi),耐熱性強,D值大;
-
微(wei)生物(wu)所處(chu)的形式(對于生物(wu)指示劑而言(yan),即為(wei)生物(wu)指示劑的載體(ti)(ti),如(ru)紙載式、不銹鋼(gang)片、液體(ti)(ti)等);
-
包(bao)裝形式;
-
溶液(ye)種類(lei)(對于(yu)(yu)處(chu)于(yu)(yu)液(ye)體中(zhong)的微(wei)生物而言(yan));
-
**的溫度。
有了D值,便(bian)可以對**后的微(wei)生物數量進行計算。初始污染(ran)菌(jun)數為N0表(biao)示(shi)(shi)(shi),**后的污染(ran)菌(jun)數用(yong)NF表(biao)示(shi)(shi)(shi),某一溫度下的D值用(yong)DT表(biao)示(shi)(shi)(shi),**時間用(yong)t表(biao)示(shi)(shi)(shi),則:
(lgN0–lgNF) = t/DT ,也即lgNF =lgN0 –t/DT
假定某一(yi)物品(pin)初始污染(ran)菌數N0 為106,某一(yi)溫度(du)T下(xia)的(de)D值為2.5min,則:
***1分鐘后,lgNF= lgN0–t/DT = 6–1/2.5 = 5.6
* **2分鐘后,lgNF= lgN0–t/DT = 6–2/2.5 = 5.2
這里可以(yi)看到(dao),隨(sui)著**時間t的無限(xian)增加,lgNF變得無窮(qiong)小,但NF是(shi)始終(zhong)大(da)于0的,也就是(shi)說,**的無菌(jun)(jun)(NF為(wei)0)理(li)論(lun)上來說是(shi)不存在的。在制藥行業(ye)中(zhong),NF為(wei)10-6,也就百萬(wan)分(fen)之一便是(shi)終(zhong)端(duan)**產品可以(yi)接受的無菌(jun)(jun)保證(概率)水(shui)(shui)平(ping)。因此,在這個(ge)案例(li)中(zhong),如果(guo)要達到(dao)百萬(wan)分(fen)之一的無菌(jun)(jun)保證水(shui)(shui)平(ping),所需要的**時間為(wei):
-6 = 6–t/2.5, 即**時間t需要30分鐘。
? 微生物的(de)耐熱性(D值)與溫度的(de)關系,Z值的(de)概念
引入D的(de)模(mo)型只考慮了同一溫(wen)度(du)(du)下(xia)的(de)**曲線,即**過程中溫(wen)度(du)(du)沒(mei)有波動時微生物數量lgN與**時間t之間的(de)關(guan)系。事實上,產品(pin)**時是無(wu)法將**溫(wen)度(du)(du)控(kong)制在某一恒定(ding)溫(wen)度(du)(du)的(de)。而D值(zhi),即微生物的(de)耐熱性(xing),是與溫(wen)度(du)(du)直接相(xiang)關(guan)的(de),溫(wen)度(du)(du)越高,D值(zhi)越小(xiao),溫(wen)度(du)(du)越低,D值(zhi)越大(da)。如果要研究產品(pin)的(de)**過程,我們就需要找到D值(zhi)與溫(wen)度(du)(du)的(de)關(guan)系。
這里,我們測定同一(yi)微(wei)生物(wu)在不同**溫度下的D值(測試方(fang)法(fa)將在本專題的**部(bu)分介紹(shao)),把微(wei)生物(wu)的D值的對數(shu)值lgD(縱坐標)與產品(pin)的溫度T(橫坐標)作曲線,會得到以(yi)下直線關系(xi):
這(zhe)里可以看出,lgD與**溫(wen)度T是成直線(xian)關(guan)系(xi)的(de)(de)(模(mo)型(xing)與lgN~t相同(tong))。通過(guo)直線(xian)可以看出,lgD與T的(de)(de)負相關(guan)性(xing)與我們研究D值(zhi)(zhi)的(de)(de)來源正好相同(tong)。同(tong)樣,為(wei)(wei)了便于理解和日常運用(yong),我們也不直接用(yong)斜(xie)率k來反應這(zhe)樣的(de)(de)關(guan)系(xi),而是引入Z值(zhi)(zhi)的(de)(de)概(gai)念;同(tong)樣,令(ling)Z=?1/k=△T/△lgD,當lgD等于1時,所需要(yao)提高的(de)(de)溫(wen)度△T恰好等于Z值(zhi)(zhi)。因此,Z值(zhi)(zhi)的(de)(de)定義即為(wei)(wei)D值(zhi)(zhi)下降(jiang)一個(ge)對數值(zhi)(zhi)所需要(yao)提高的(de)(de)溫(wen)度。
研究表明,大部分的微(wei)(wei)生(sheng)物Z值(zhi)(zhi)均在10 ℃左右(濕熱**),因此,在無特(te)殊說(shuo)明的情況下,為(wei)簡化計算,Z值(zhi)(zhi)均默認為(wei)10 ℃。
? 不同溫度下**時間的換算,等效**時間FTref的概念
**工藝雖然有溫度(du)波(bo)動,但是有了Z值的(de)概念(nian),我們便可(ke)以將(jiang)不(bu)同溫度(du)下的(de)等效(xiao)**時(shi)(shi)間(jian)通過D值進行(xing)換算。將(jiang)不(bu)同溫度(du)下得**時(shi)(shi)間(jian)用FTT表(biao)示,要換算120 ℃下的(de)**時(shi)(shi)間(jian),等效(xiao)于121 ℃下的(de)**時(shi)(shi)間(jian),可(ke)根據lgN~T的(de)關系(xi)曲線:
F121 = D121×△lgN
F120 = D120×△lgN
所(suo)(suo)謂等效**時間,即(ji)**效果相同所(suo)(suo)需要的**時間,因此兩者的△lgN相等。兩等式(shi)相除,得到:
這個公式需(xu)要我們考察D值與(yu)溫度的(de)(de)關(guan)系,這恰(qia)好是Z值的(de)(de)概(gai)念。根據考察Z值時D值與(yu)溫度的(de)(de)關(guan)系,我們得到:
故,120 ℃**1分鐘(zhong),其相當于(yu)在121 ℃下的(de)**時(shi)間為0.79分鐘(zhong)。
同理,我們可以計算出**過程中(zhong)任(ren)何溫度(T)下的**時間(FT)相當于(yu)其在121 ℃下的等效(xiao)**時間(F121),即(ji):
F121 = FT×10(T-121)/Z
同樣,我們也可以將**過程中的任何溫度(T)下的**時間(FT)換算為其在任何參考溫度Tref下的等效**時間(FTref),即:
FTref = FT×10(T-Tref)/Z
? **工藝的**能力,F0值的概(gai)念
如果我們把所有的**工藝都統一(yi)(yi)(yi)換(huan)算(suan)為同一(yi)(yi)(yi)溫度(du)下的**時間(jian)(jian)(jian),則不(bu)同**工藝的**能(neng)力便(bian)有了可(ke)比性,也可(ke)以針對**能(neng)力制定量化的標準(zhun),這一(yi)(yi)(yi)參考溫度(du)便(bian)是(shi)121.1℃。如果把**過程(cheng)中每(mei)一(yi)(yi)(yi)時刻的**時間(jian)(jian)(jian)都換(huan)算(suan)為121.1℃的**時間(jian)(jian)(jian),再進(jin)行(xing)累積(ji),得(de)到(dao)整(zheng)個**過程(cheng)在121.1℃下的**時間(jian)(jian)(jian),這一(yi)(yi)(yi)時間(jian)(jian)(jian)便(bian)是(shi)F0值(ISO17665,Z值定義為10℃)。
二、**工藝(yi)的**能(neng)力要(yao)求
前(qian)面我們介紹過,產(chan)品(pin)的(de)無菌保證水(shui)平(SAL)為(wei)10-6。而**工藝(yi)要(yao)達到這樣的(de)SAL,所需要(yao)的(de)**能力取(qu)決于**前(qian)的(de)微生(sheng)物(wu)(wu)負(fu)載(zai)(**前(qian)的(de)微生(sheng)物(wu)(wu)數量(liang))和微生(sheng)物(wu)(wu)負(fu)載(zai)的(de)耐熱性(xing)。制藥行業一般(ban)都(dou)有嚴(yan)格的(de)微生(sheng)物(wu)(wu)污染(ran)控制措(cuo)施,**前(qian)的(de)微生(sheng)物(wu)(wu)負(fu)載(zai)(N0)一般(ban)不會超過1066,故106便(bian)認為(wei)是微生(sheng)物(wu)(wu)負(fu)載(zai)的(de)*差(cha)條件(jian)(jian);自然界中很少(shao)會發現D121℃大于0.5分(fen)鐘(zhong)的(de)微生(sheng)物(wu)(wu),故D121℃值為(wei)1分(fen)鐘(zhong),便(bian)認為(wei)微生(sheng)物(wu)(wu)負(fu)載(zai)耐熱性(xing)的(de)*差(cha)條件(jian)(jian)。
F0 = D121℃×(lgN0-lgNt)= 1×(6-(-6)) = 12分鐘
備注:EMA要求不(bu)低于15分鐘。
此時,由于微生物負載(zai)的數量和耐熱性都(dou)取*差條件,日(ri)常**時,對(dui)于二者的監控不是(shi)必(bi)須的。
F0= D121℃×(lgN0-lgNt) = 1×(2-(-6)) = 8分鐘(zhong)
這也(ye)是GMP規(gui)定F0值一般不低(di)于(yu)8分鐘的原因。此(ci)時(shi),微(wei)生物負載的數量 不是取(qu)的*差條(tiao)件,日常**時(shi)需要(yao)對其進行(xing)監(jian)控;而耐(nai)熱性取(qu)*差條(tiao)件, 故對耐(nai)熱性的監(jian)控不是必須的。
F0= D121℃×(lgN0-lgNt) = 0.4×(2-(-6)) = 3.2分鐘
此時,微生物負載的數(shu)量和耐熱性(xing)都(dou)不是(shi)取*差(cha)條件,日常**時需要對兩(liang)者同時進行監控。
三(san)、**工藝驗(yan)證中(zhong)的(de)生物指示劑
根據2010年版GMP的(de)要(yao)求,“第六十三條 任何**工(gong)(gong)藝在投入使用(yong)(yong)前,必須采用(yong)(yong)物(wu)(wu)理(li)(li)檢(jian)(jian)測(ce)手段和生(sheng)物(wu)(wu)指(zhi)示(shi)劑,驗證(zheng)其對產品或物(wu)(wu)品的(de)適用(yong)(yong)性及所(suo)有部位達(da)到了**效(xiao)果。”因(yin)此(ci),在驗證(zheng)某(mou)一(yi)(yi)**工(gong)(gong)藝時,不僅僅要(yao)采用(yong)(yong)物(wu)(wu)理(li)(li)的(de)檢(jian)(jian)測(ce)手段(對于(yu)(yu)濕(shi)熱**而言(yan),主要(yao)是溫度,還包(bao)括壓力(li)、蒸(zheng)汽質量等),還需(xu)要(yao)采用(yong)(yong)生(sheng)物(wu)(wu)指(zhi)示(shi)劑進行檢(jian)(jian)測(ce),以(yi)確保**工(gong)(gong)藝達(da)到預期(qi)的(de)**效(xiao)果。單(dan)純的(de)物(wu)(wu)理(li)(li)測(ce)試,一(yi)(yi)方面其檢(jian)(jian)測(ce)的(de)參(can)數有限,不能反應所(suo)有的(de)影響因(yin)素對于(yu)(yu)**工(gong)(gong)藝的(de)影響。常(chang)見(jian)的(de)濕(shi)熱**,主要(yao)檢(jian)(jian)測(ce)的(de)參(can)數為(wei)溫度和壓力(li),但是,蒸(zheng)汽質量(過熱值、干燥度、不凝氣(qi)體)、產品的(de)特性(微(wei)(wei)生(sheng)物(wu)(wu)的(de)耐熱性與其所(suo)處的(de)環(huan)境相關)等對于(yu)(yu)**效(xiao)果的(de)均有影響,同(tong)時,物(wu)(wu)理(li)(li)檢(jian)(jian)測(ce)基(ji)于(yu)(yu)前面所(suo)述(shu)的(de)理(li)(li)論模型(xing)進行預測(ce)的(de),實際(ji)狀況與理(li)(li)論模型(xing)不一(yi)(yi)定完全契合(he)。因(yin)此(ci),要(yao)驗證(zheng)**工(gong)(gong)藝,還需(xu)要(yao)用(yong)(yong)生(sheng)物(wu)(wu)指(zhi)示(shi)劑進行考察,以(yi)確保物(wu)(wu)理(li)(li)殺滅(mie)效(xiao)果(用(yong)(yong)FPHY)和生(sheng)物(wu)(wu)殺滅(mie)效(xiao)果(FBIO)具(ju)有一(yi)(yi)致性。這(zhe)便是生(sheng)物(wu)(wu)指(zhi)示(shi)劑的(de)選擇基(ji)礎。
四、生物(wu)指示(shi)劑的選擇-物(wu)理殺滅和生物(wu)殺滅的關(guan)系
選擇(ze)生物指(zhi)示(shi)劑的(de)選擇(ze)的(de)主要依(yi)據是證(zheng)明FPHY和FBIO具(ju)有(you)一致性(xing),即物理殺滅效果(guo)能(neng)夠實(shi)際(ji)殺滅相應的(de)生物指(zhi)示(shi)劑。實(shi)際(ji)操作過程時,我(wo)(wo)們通常(chang)會選擇(ze)合(he)適的(de)生物指(zhi)示(shi)劑,經過**工(gong)藝**后(hou)進行培養,如果(guo)全部呈陰性(xing),那么我(wo)(wo)們判定**工(gong)藝符(fu)合(he)預(yu)定標準(zhun)。
假定某(mou)一(yi)**工藝(yi),其物理殺滅(mie)效果(FPHY)為(wei)F0值(zhi)不低于12分鐘(zhong)(zhong),理論來說,為(wei)證明一(yi)致性,所(suo)使用FBIO也(ye)應為(wei)12分鐘(zhong)(zhong),這樣才能證明兩(liang)者是一(yi)致的(de)。假定所(suo)選擇(ze)的(de)生物指示劑的(de)D121℃為(wei)2分鐘(zhong)(zhong),數量為(wei)106,則其殺滅(mie)所(suo)需要的(de)時間理論上為(wei):
FBIO= D121℃×(lgN0-lgN) = 12分鐘
看上去,FPHY和FBIO的時間剛(gang)好(hao)相當(dang),可選擇(ze)該(gai)生物指示劑進行**的驗證。然而,在(zai)介紹無菌保證水平的時候我們(men)知道,微(wei)生物存活是一個概率問(wen)題。在(zai)這個案例中,當(dang)FBIO為12分(fen)鐘時,**后(hou)的污染菌數量NFF為:
lgNF =lgN0–t/DT = 6–12/2 = 0,則 NF=1
也(ye)就是(shi)說,產品中依然有菌,生物指示(shi)劑**后(hou)培養時(shi)很大概(gai)率呈(cheng)陽性(xing)。那(nei)么,問題(ti)來(lai)了,生物指示(shi)劑要如何(he)選擇,才能證明FPHYHY與FBIO是(shi)一(yi)致的?根(gen)據EP9.0的要求,在進(jin)行**工藝驗證時(shi),驗證時(shi)時(shi)所選擇的**時(shi)間(jian)(tvl),應將生物指示(shi)劑殺滅到10-1到10-3的水平,即
以上述(shu)生物(wu)指示劑為例,為驗證FPHYY和FBIO是一致的(de),選擇的(de)FPHY應將生物(wu)指示劑**后(hou)的(de)數量NF下(xia)降(jiang)至(zhi)-1至(zhi)-3個log值(原(yuan)來(lai)下(xia)降(jiang)至(zhi)0個log值),即:
即:2×(6+1) ≤tvl≤2×(6+3)
即:14≤tvl≤18 (分(fen)鐘)
而PDA則建(jian)議將生(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)示劑(ji)殺滅(mie)到10-2的(de)(de)水平。(備(bei)注:將生(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)示劑(ji)殺滅(mie)到102所需(xu)(xu)要的(de)(de)時(shi)間(jian)(jian),即**結(jie)束(shu)后,生(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)示劑(ji)全(quan)部(bu)(bu)呈陽性的(de)(de)時(shi)間(jian)(jian),為生(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)示劑(ji)的(de)(de)存(cun)活時(shi)間(jian)(jian),survival time;將生(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)示劑(ji)殺滅(mie)到10-4所需(xu)(xu)要的(de)(de)時(shi)間(jian)(jian),也即生(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)示劑(ji)**后全(quan)部(bu)(bu)呈陰(yin)性的(de)(de)時(shi)間(jian)(jian),為生(sheng)(sheng)物(wu)指(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)示劑(ji)的(de)(de)殺滅(mie)時(shi)間(jian)(jian), kill time)。如果(guo)驗證(zheng)時(shi),選(xuan)擇的**時間tvl大于kill time,則無法證明FPHY和FBIO具有一致性。這時,我們可以選擇減少**時間(如半循環),或降低**溫度(這時需要知道生物指示劑在實際**條件下的Z值)來進行**工藝的驗證,當然也可以選擇合適的生物指示劑,使得該生物指示劑的survival time和kill time滿足**參數的要求。
總結:本文介紹(shao)了**的(de)原理(li)、**的(de)動力(li)學、**參數和(he)**工藝的(de)選擇,在此基礎之(zhi)上,介紹(shao)了如(ru)何選擇合適的(de)生(sheng)物(wu)(wu)指示劑,以驗證物(wu)(wu)理(li)殺(sha)滅(mie)和(he)生(sheng)物(wu)(wu)殺(sha)滅(mie)的(de)一(yi)(yi)致性。下一(yi)(yi)部分,我們(men)會根據(ju)此理(li)論基礎,介紹(shao)生(sheng)物(wu)(wu)指示劑的(de)種(zhong)類(lei)、選擇、使用和(he)質量控制(zhi)。