細胞培(pei)養質(zhi)量的好壞,直接關系(xi)到(dao)實(shi)驗進行(xing)得順(shun)利與否。無數童鞋都經歷過因為細胞污染而影響實(shi)驗進度的問(wen)題,被老(lao)板批評是(shi)小事,要是(shi)影響到(dao)按時畢業(ye)可就粗大(da)事了。
作者:解螺旋(xuan).毛博
來(lai)源:解螺旋,醫生科研助(zhu)手
下面,毛(mao)博(bo)討論一下細胞培養常見污染(ran)的識別及處(chu)理(li)。
1、**:
識別(bie):**在顯微鏡下為黑色細沙(sha)狀,根據感染**的不(bu)(bu)同(tong)(tong),可有(you)不(bu)(bu)同(tong)(tong)的外(wai)形,有(you)球形,鏈形,桿形等。大家不(bu)(bu)必(bi)深究。只要發(fa)現培(pei)養液渾濁變黃,培(pei)養瓶頂部有(you)一(yi)層(ceng)細沙(sha)一(yi)樣的東西。就知道(dao)大事(shi)不(bu)(bu)好啦。見(jian)下圖。
處理:可在培養液中加相應的(de)(de)(de)***處理。可以用四環素(su),慶大霉(mei)素(su),或(huo)者鏈霉(mei)素(su),前兩者的(de)(de)(de)工作(zuo)濃度是(shi)(shi)50 μg/ml;鏈霉(mei)素(su)的(de)(de)(de)工作(zuo)濃度是(shi)(shi)100 μg/ml。其實,毛(mao)毛(mao)蟲說句實話,一旦發生污染(ran),就已(yi)(yi)經大勢已(yi)(yi)去了(le)。如果細胞不是(shi)(shi)特別特別珍貴(gui)的(de)(de)(de)話,還是(shi)(shi)趁早扔了(le),重起爐(lu)灶吧。
所以,*重要的還是防范于未然。做好培養間,CO2孵箱(xiang),器皿和培養液的****工作。在操作的時候,嚴(yan)格執行無(wu)菌操作規(gui)范。
2、霉菌:
識別:因為培(pei)養(yang)(yang)液(ye)是清亮的,所以(yi)霉菌污染非常難以(yi)早期發(fa)現,等(deng)發(fa)現時往(wang)往(wang)已經為時過晚(wan)了(le)。培(pei)養(yang)(yang)液(ye)中(zhong)慢(man)(man)慢(man)(man)地出現絮(xu)狀雜質,鏡下可(ke)見(jian)呈細(xi)絲狀的團狀漂浮物,如同風中(zhong)柳絮(xu)。細(xi)胞(bao)仍可(ke)生(sheng)長(chang),但時間一長(chang),細(xi)胞(bao)的狀態就(jiu)變差。見(jian)下圖(tu)。
處理:細(xi)胞(bao)一旦被霉(mei)(mei)菌污染,很難挽救,兩性霉(mei)(mei)素(su)(su)B或制霉(mei)(mei)菌素(su)(su)都于事無補,建(jian)議果(guo)斷舍棄(qi)該污染細(xi)胞(bao),將環境徹(che)底**。
采用酒精徹底底地擦洗一遍CO2孵箱(xiang)。然(ran)后再用新潔爾滅(mie)擦洗一遍。把水盤里加上飽和(he)量(liang)的硫酸(suan)銅。
3、支原體:
識別:多為多邊形,培(pei)養(yang)液一般(ban)會變渾濁(zhuo)。支(zhi)原體(ti)感染細胞(bao)以后,細胞(bao)病變不很(hen)明顯,只是和你一起慢(man)慢(man)變老。支(zhi)原體(ti)污染后,可影響所有的(de)細胞(bao)生長參數(shu)。故進行實驗(yan)前(qian),必(bi)須確(que)認細胞(bao)為mycoplasma-free,實驗(yan)結果之數(shu)據(ju)方有意(yi)義。
處(chu)(chu)理(li):沒(mei)有什么好處(chu)(chu)理(li)的(de)。直接扔了吧。污染到其(qi)他的(de)細(xi)胞就虧大發了。還是那(nei)句話(hua),預防為主。
4、黑蛟蟲:
識別:誰(shui)都不知道(dao)所謂的(de)(de)“黑(hei)(hei)膠蟲”是(shi)什么(me)東西。據說是(shi)納米級的(de)(de)**。低倍下(xia)為黑(hei)(hei)色(se)點狀,高(gao)倍下(xia)可(ke)看見黑(hei)(hei)色(se)的(de)(de)小蟲游(you)來游(you)去。培(pei)養液(ye)也是(shi)不渾的(de)(de),一般(ban)不會太影響。但是(shi)如果(guo)太多了,也會影響細(xi)胞(bao)生長(chang)和實驗(yan)結果(guo)。
處理(li):因為根本(ben)不知道這是什(shen)么物種(zhong),所以(yi)也談不上(shang)什(shen)么處理(li)方式。建議如果細胞(bao)有可(ke)能是此(ci)種(zhong)污染的話,可(ke)以(yi)增加細胞(bao)的種(zhong)板(ban)密度,以(yi)提高細胞(bao)的生存(cun)率。
5、**:
識別:**污染(ran)和霉(mei)菌污染(ran)差不多。一般(ban)培(pei)養液清(qing)亮,所以很難早期(qi)發現。鏡下有(you)(you)時候象絲狀(zhuang),有(you)(you)時候象珊(shan)瑚狀(zhuang)。慢慢地會長出很細的黑色絲狀(zhuang)物。這個時候,已經晚了,細胞很難救活了。
處理:同霉菌污染一樣,沒有什么好處理的,直接扔了吧。然后徹底****培養間,CO2孵箱,器皿和培養液。亡羊(yang)補牢吧。
綜上所述(shu),兩(liang)個原則:預防為主,果斷扔(reng)掉。如(ru)果細(xi)胞實在特(te)(te)別(bie)特(te)(te)別(bie)特(te)(te)別(bie)珍貴。那就只好死馬當活馬醫(yi)了。用廣(guang)譜(pu)***5倍推(tui)薦濃度(du)(du)沖擊一下。當然細(xi)胞狀態差的(de)話(hua)不一定熬得住。同時增加傳代時的(de)細(xi)胞的(de)密度(du)(du),培養(yang)基中的(de)血(xue)清(qing)濃度(du)(du),勤換液。也可以不加***進行單(dan)克(ke)隆有限稀(xi)釋(shi)至96孔板,再克(ke)隆化(hua)。